ADN recombinante en la Naturaleza y Artificial en Infecciones de las Vías Urinarias por E.coli Uropatógena

ADN recombinante en la naturaleza (plásmidos)

Una ejemplo de ADN recombinante, que ocurre normalmente en la naturaleza, es la Recombinación genética. La recombinación genética es un proceso que lleva a la obtención de un nuevo genotipo a través del intercambio de material genético entre secuencias homólogas de DNA de dos orígenes diferentes. Los integrones de clase 1 son elementos genéticos que llevan un conjunto variable de genes de resistencia a antibióticos, se propagan fácilmente de forma horizontal entre las bacterias, lo que contribuye a la aparición de clones resistentes a múltiples fármacos. En  aislados uropatogénicos de Escherichia coli (UPEC) que tienen integrones de clase 1, por medio de experimentos de conjugación y transducción, las cepas donantes y resultantes se caracterizaron por sus resistencias a los antibióticos, la presencia de genes sul1, sul2 y sul3, matrices de casetes de integrones, replicones de plásmidos y región tra.

ADN recombinante artificial:

La construcción de proteínas de fusión como biomoléculas para el desarrollo de una vacuna viable contra la IU. Las adhesinas fimbriales (FimH, CsgA y PapG) de UPEC son factores de virulencia que contribuyen a la adhesión, invasión y formación de comunidades bacterianas intracelulares. La generación de proteínas recombinantes a partir de adhesinas fimbriales como una sola molécula se obtiene mediante tecnología de fusión. Unos pocos estudios in vivo e in vitro han demostrado que las proteínas de fusión proporcionan una respuesta inmune eficaz y protección contra la ITU producida por la UPEC.

Bibliografía:
Poey ME, Laviña M. Horizontal transfer of class 1 integrons from uropathogenic Escherichia coli to E. coli K12. Microb Pathog [Internet]. abril de 2018 [citado 24 de noviembre de 2018];117:16-22. Disponible en: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0882401017313578
Luna-Pineda VM, Ochoa S, Cruz-Córdova A, Cázares-Domínguez V, Vélez-González F, Hernández-Castro R, et al. Infecciones del tracto urinario, inmunidad y vacunación. Bol Med Hosp Infant Mex [Internet]. 26 de septiembre de 2018 [citado 24 de noviembre de 2018];75(2):67-78. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29658949

Prueba Molecular de Infecciones de las Vías Urinarias por E.coli Uropatógena

El análisis de microarrays reveló que una gran variedad de procesos se vieron afectados por la CORM-2, incluida una tendencia general de regulación a la baja en el metabolismo energético y vías de biosíntesis y regulación de la respuesta SOS y reparación del ADN. Varios genes implicados en la virulencia (ibpB), resistencia a los antibióticos (marAB, mdtABC) y formación de biofilm (bhsA, yfgF) fueron regulados al alza, mientras que algunos genes involucrados en la virulencia (kpsC, fepCEG, entABE), resistencia a los antibióticos (evgA) y biofilm La formación (artIP) fue regulada a la baja. Los datos de los microarrays mostraron que cusF y hdeA fueron significativamente menos reprimidos en las células después de la exposición repetida a CORM-2.

Bibliografía: 

1. Firoozeh F, Saffari M, Neamati F, Zibaei M. Detection of virulence genes in Escherichia coli isolated from patients with cystitis and pyelonephritis. Int J Infect Dis [Internet]. diciembre de 2014 [citado 18 de noviembre de 2018];29:219-22. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25449257

Prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) de Infecciones de las Vías Urinarias por E.coli Uropatógena

Tema: Perfil global de expresión génica y susceptibilidad a los antibióticos después de la exposición repetida a la molécula-2 liberadora de monóxido de carbono (CORM-2) en Escherichia coli uropatogénica productora de ESBL multirresistente
Objetivo: Identificar varias ontologías de genes enriquecidos, vías modificadas y genes únicos que son blanco de CORM-2 en un dispositivo multirresistente.
Muestra: Dos cepas clínicas de UPEC, el aislado de E. coli productor de BLEE (ESBL7) y el aislado de producción de ESBL UPEC2
Ácido Núcleico: ADN, ARN
Genes: ibpB
            marAB, mdtABC
            kpsC, fepCEG, entABE
PCR: PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR)
40 ciclos
D: 95 ° C 15 min
H: 60 ° C 30 seg
E: 72 ° C  30 seg
Visualización: EFO

Fig. 5. Multiplex PCR de genes fimbriales utilizando cDNA de E. coli CFT073 cultivado en orina o LB como plantilla. (A) PCR multiplex de transcriptos de focH, c1936, c2395, ppdD y papA de bacterias aisladas al principio (carriles 4, 8, 12 y 16), medio (carriles 5, 9, 13 y 17), y tardía Fase exponencial (carriles 6, 10, 14 y 18), así como la fase estacionaria (carriles 7, 11, 15 y 19). NTC, control sin plantilla; positivo Control del ADN genómico. (B) PCR de yadN (carriles 2 a 9) y multiplex PCR de yehA, aufA, ygiL, yfcV, y papA (carriles 10 a 20) transcripciones de bacterias aisladas temprano (carriles 2, 6, 13 y 17), media (carriles 3, 7, 14 y 18), y fase exponencial tardía (carriles 4, 8, 15 y 19), así como la fase estacionaria (carriles 5, 9, 16 y 20).

Bibliografía:
1.  Sahlberg Bang C, Demirel I, Kruse R, Persson K. Global gene expression profiling and antibiotic susceptibility after repeated exposure to the carbon monoxide-releasing molecule-2 (CORM-2) in multidrug-resistant ESBL-producing uropathogenic Escherichia coli. Saraiva LM, editor. PLoS One [Internet]. 7 de junio de 2017 [citado 11 de noviembre de 2018];12(6):e0178541. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28591134

Prueba de tamizaje y confirmatoria de Infecciones de las Vías Urinarias por E.coli Uropatógena

Las pruebas de tamizaje se realizan con el objetivo de establecer quién puede padecer cierta enfermedad y quién no, en cualquier momento de la vida de un ser humano, permite la detección temprana de factores de riesgo, infección asintomática, o estadios tempranos de una enfermedad clínica, por lo tanto se permite un diagnóstico temprano, tratamiento o una intervención.

En el caso de las infecciones de vías urinarias son pruebas rápidas, que permiten una orientación inicial; es conveniente realizarlas en orina de chorro medio.

La detección de bacteriuria asintomática a través del EMO (leucocituria, nitritos y bacterias) tiene una sensibilidad de 50% a 92% y un valor predictivo negativo de 92%. La sensibilidad disminuye ante la presencia de leucorrea

Prueba Confirmatoria para el diagnostico: El urocultivo es la prueba de elección adecuada y más práctica para el diagnóstico de BA, el cual se establece con el aislamiento de más de 100.000 unidades formadoras de colonias/mL de un solo germen. Se acepta la detección en una sola muestra obtenida del chorro medio de orina, para el diagnóstico de BA. Esta prueba tiene valores de sensibilidad y especificidad adecuados para ser considerada una prueba confirmatoria, 99.9% de sensibilidad y especificidad del 99.3%.

Bibliografía:

http://www.scielo.org.co/pdf/inf/v17n3/v17n3a02.pdf

http://scu.org.co/userfiles/file/2018/ABRIL/Guia%20De%20Practica%20Clinica%20De%20Infeccion%20de%20vias%20urinarias%20en%20el%20adulto.pdf

http://www.imss.gob.mx/sites/all/statics/guiasclinicas/078GER.pdf

http://instituciones.msp.gob.ec/documentos/Guias/Guia_infeccion_v_u.pdf